引言

2023年中国中药市场规模达7200亿元人民币（数据来自前瞻产业研究院），其中包含含中药材、中成药、中药饮片。中药市场在发展的同时，为保证药物安全、有效和质量可控，更多稳定的质量检测方法被确认下来。中药成分相对复杂，具有一定的分析难度。选择合适的色谱柱帮助快速有效进行样品检测。

化药分子量相对较小，但因其合成工艺中易产生结构相似杂质，包含异构体、副产物等，且不同化药分子的结构差异较大，部分小分子可能形成聚合物的形态。近年来，固相合成方式发展迅速，合成多肽、小核酸药物成为又一研发热点，具有一部分化药的特征。

中药、化药分子常用反相、正相以及HILIC模式色谱柱进行质量控制，不同分子差异较大，对色谱柱的选择具有不同倾向性，下面介绍赛分科技适用于化药、中药，还有合成多肽和小核酸的色谱柱应用。

色谱柱的选择

反相色谱（Reverse phase，RP）是应用最为广泛的一类，同时因为微球的基质以及表面的不同修饰方式、配基种类及其键合方式的不同，导致得到的色谱柱选择性差异较大。从基质看，反相色谱柱常见基质为硅胶、聚合物微球，结构可分为多孔，表面多孔核壳结构以及实心等几种结构。一般单纯硅胶基质因其本身不耐碱，因而一般硅胶基质色谱柱pH使用范围2-8之间，通过采用杂化或者表面键合方式优化可以提高一定的pH耐受性。而聚合物微球一般具有良好的化学稳定性，可耐受宽pH范围，可达1-14。多孔优势在于可以提升比表面积和碳载量，进而提高物质的保留时间，对于保留较差的分子效果较好，反相分析中如果疏水性较强，不建议采用高碳载量色谱柱。核壳型色谱柱通过孔径和表面官能团双重作用，内核实心，对比同类色谱柱具有高效、低背压的优势。

图1.色谱柱选择关键参数考量点

在选定基质后，需要确认合适的基团（官能团），十八烷基（C18，ODS）、辛基（C8）、丁基（C4）为常见反相官能团，疏水性逐渐减弱，苯基（Phenyl）因其芳香环的结构，对一些含芳环的化合物具有良好的选择性。除了常见反相色谱柱，正相（Normal Phase，NP）和亲水作用色谱（Hydrophilic interaction chromatography，HILIC）可以补足反相分析较难的样品。正相色谱对于非极性化合物具有高分辨率，对于非手性异构的样品具有较好分离效果。通过调节流动相的组成，正相和HILIC模式可以进行切换。常见如氰基（Cyano）、氨基（Amino）、酰胺基（Amide）、活性硅胶等，均可切换为HILIC模式，采用低比例水作为流动相体系，用于分析强极性化合物。

案例分享

结合实际的样品，介绍几种常见化药和中药样品的分析案例，可供参考。文末附“常规色谱柱产品及应用推荐表”，可点击下载查阅。

抗生素类样品——阿奇霉素分析案例

采用药典分析方法对阿奇霉素色谱柱系统适用性进行测试，对照药典图谱可满足分析要求。

色谱条件：

Column: BR-C18 (5?m, 120 ?, 4.6?250 mm)

Mobile phase: A: 50 mM K₂HPO₄ pH 8.2- ACN (45:55)

B: 甲醇

Flow rate: 1 mL/min              

Detector: UV 210 nm         

Column T: 30℃          

Injection volume:50 ?L     

Sample: 阿奇霉素系统适用性样品

图2.阿奇霉素系统适用性样品分析图

头孢类药物也是抗生素的一大类，对于部分头孢化合物在制备工艺过程或储存中可能产生聚合物杂质，药典中对部分头孢样品的聚合物杂质进行的质量控制。

色谱条件

Column: Cef-SEC (5 μm, 150?, 7.8?300 mm)

Mobile Phase: 5 mM Phosphate buffer (pH 7.0) : ACN = 95 : 5 ( v/v )

Flow rate: 0.8 mL/min

Detector: UV 254 nm

Column T: 25℃

Injection volume: 10 μL

Sample: 头孢米诺钠(1.0 mg/mL 0.1 M NaOH破坏)

图3. 头孢米诺钠经碱破坏后聚合物分析图谱

中药中皂苷类天然产物常出现在蔷薇科、石竹科、桔梗科、百合科、薯蓣科、五加科、远志科、龙舌兰科等药材中，如三七，知母、远志、人参等。其中三七中皂苷为其主要药效成分，以获取有70余中，其中主要药效成分为人参皂苷Rg₁、Rb₁、Rd、Re和三七皂苷R₁，采用Opalshell-C18核壳色谱柱可快速将集中皂苷成分进行分离分析。

色谱条件：

Column: Opalshell-C18 (2.6?m, 4.6 x 50 mm）

Mobile phase: A: ACN; B: H₂O

Flow rate: 1.5 mL/min

Detector: UV 203 nm

Column temperature: 25℃

Injection volume: 10 ?L

Sample: 2.5 mg/mL三七皂苷（70%甲醇稀释）

图4.三七中皂苷成分液相分析图谱

推荐色谱柱订购信息